Auditory & 前庭技术(AVT)核心

听觉 & 前庭技术(AVT)核心的建立是为了提供基础设施,以支持研究项目负责人和主要研究者与博士. 理查德J. 贝鲁奇翻译听力中心开展听觉和前庭研究跨全范围的实验模型系统, 从单分子分析到整个生物体模型.

AVT核心位于克赖顿大学医学院的克里斯大楼内,由以下共同核心主任指导:

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莫莉·麦克德维特-质谱
莫莉·麦克德维特博士
质谱分析
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Dr. 安东尼年代. Stender
安东尼·斯坦德博士
成像专家和成像核心经理
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迈克尔·尼科尔斯博士
迈克尔·尼科尔斯博士
AVT核心主任-物理学教授
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​​​​​​​D. David. 史密斯博士
D. David. 史密斯博士
生物化学教授
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Sarath
Sarath Vijayakumar博士
电生理学,分子生物学

 

AVT核心提供广泛的服务:

  • 电生理学(Sarath Vijayakumar)
  • 分子生物学(Sarath Vijayakumar)
  • 影像(安东尼·斯坦德)
  • 质谱分析(Molly McDevitt)

AVT核心设施及其人员也可以扩大技术选择的范围, 促进多学科研究合作, 在准备有才华的新研究者提交新的研究建议方面发挥重要作用, 以及对研究生和博士后的技术培训. AVT核心将继续采用新的方法作为核心选项,为中心研究人员提供领先的技术.

 

 

 

电生理设施由皇冠体育博彩校区的主要设施(crisi大楼的304和334室)和BTNRH和UNMC的两个卫星设施组成.

-电生理设施提供以下服务:

  •  听觉脑干反应(ABR)
  • 失真积耳声发射(DPOAE)
  • 宽带声阻抗(WAI). 即将到来的...
  • 耳蜗电位(EP)
  • 耳蜗麦克风(CM)
  • 前庭感觉诱发电位(VsEP)
  • 视频摄影VOR/OKR

现有工具包括:

  • 用于测量听觉诱发电位和耳声发射的TDT RZ6系统.
  • Axopatch 200B集成膜片钳放大器和1440A数字板用于记录耳蜗电位(CM), CAP, 小型哺乳动物的EP)和斑马鱼的麦克风反应.
  • 基于NI的前庭诱发电位系统.
  • 基于ISCAN 200的VOR/OKR系统

 

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AVT

 

*导演:Sarath Vijayakumar

位于克里斯1楼209室, 该设施配备了分子生物学和基因组实验常用的仪器.

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图片2

由Luminex开发的Milliplex分析仪使用多路xMAP头技术,允许同时分析广泛选择的分析物(例如.g. 细胞因子, 激素和脂肪因子)在广泛的疾病状态, 包括代谢疾病, 炎症, 神经退行性疾病, toxicity, 癌症及其他疾病.  使用Milliplex系统,您可以:

  • 同时从培养基,血清和其他基质中定量多达100个蛋白质目标.
  • 在60分钟内自动分析多达96个样品(一般格式:88个样品孔+ 8个标准孔)
  • 显著增加有用数据的数量
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图3

QuantStudio 3实时PCR系统专为需要负担得起的用户而设计, 易于使用的实时PCR系统,不影响性能和质量.  简化的设计和分析软件是理想的第一次和有经验的用户.  采用经过验证的OptiFlex技术(具有4个耦合通道和白光LED),并具有三个独立的Veriflex温度区域, QuantStudio 3系统为广泛的基因组应用提供了更高的数据准确性和灵敏度.  应用生物系统ProFlex热循环仪也可用于常规PCR应用.

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图4

ChemiDoc MP成像系统是一款功能齐全的仪器,用于成像和分析凝胶和western blots.  它是专为解决多重荧光western印迹, 化学发光检测, 一般凝胶文档应用, 以及无染色技术成像的需求.  功能包括:

  • 一体化灵活成像-获得精确, 可再生的荧光, 化学发光,化合光, 以及比色凝胶和印迹检测, 在单个系统中进行分析和记录
  • 多重荧光western blotting -同时检测多达三种蛋白质,消除了剥离和重新探测的需要
  • 易于使用-功能包括根据应用自动选择最佳光源, 自动对焦, 自动曝光模式, 和预览功能,确保最佳的图像.  在屏幕上的帮助下学习几分钟.
  • Stain-free protein normalization - stain-free imaging permits the normalization of bands to total protein in both in gels and blots; eliminates the need for housekeeping proteins
  • 样品托盘和智能托盘技术-三个样品托盘可覆盖不同的成像应用. 智能托盘技术自动识别特定应用的托盘,并相应地调整成像参数和软件选项
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图5

该10X铬控制器采用先进的微流体执行单细胞活动在多个维度, 包括基因表达, 细胞表面蛋白, 免疫clonotype, 抗原特异性, 以及染色质可及性.  它与铬单细胞产品兼容, 包括单细胞基因表达, 单细胞免疫图谱, 单细胞ATAC.

  • 每次运行处理1-8个样品
  • 每个样品收集500-10,000个细胞
  • 生产的文库在创新的基因组学和生物信息学核心中与Illumina NextSeq 2000兼容

 

*导演:Sarath Vijayakumar

我们提供多种先进的研究显微镜,可用于基于成像的实验.  我们还提供了一系列可用于图像分析的复杂软件包.  如果您对这些工具有任何具体问题或对获得这些工具有任何疑问,请咨询.  我们很乐意提供培训以及咨询用户有关他们的实验和分析需求.  新用户必须接收 official 在使用设施的工具或预订系统之前,培训并签署用户协议.

仪器:

先进的成像核心主机三个共聚焦激光扫描显微镜从蔡司.  所有三种显微镜提供DIC成像能力和流行的物镜放大(10倍), 20X, 40X, 63X). 倒置的LSM 700提供四种激发波长(405, 488, 555, 639 nm), 而我们的直立LSM 710有7激光线(405, 458, 488, 514, 561, 594, 633), 2 PMT’s, 还有一个32通道的探测器.  该设施还拥有一台带有airscan的蔡司LSM 980, 它提供了高分辨率, 提高灵敏度, 以及活细胞成像的能力.  Finally, AVT-高级成像核心管理着蔡司PALM组合系统, 用户可以在一台显微镜下对标准玻片样品进行显微解剖和显微操作.  这些显微镜可以在克里斯复合体的407、332和312室找到.

 

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Zeiss

高级成像团队还管理与CU-IBIF相关的几台专业显微镜, 皇冠体育博彩大学综合生物医学成像设施, 位于324房间, 325, 326C, 376, 和克里斯复合体的382A.

首先是倒置尼康Ti-2共聚焦显微镜与横河旋转盘, 滨松虎鲸闪光灯相机, 还有孵化阶段.  这台显微镜能进行快速的全画幅成像, 它可以以比典型的点扫描共聚焦快10倍的速度执行z堆叠.  这台显微镜配备了实时超分辨率, 这使得活细胞实验所需的高速成像成为可能.  它也是延时成像实验的理想选择.

下一个是直立的徕卡SP8共聚焦显微镜,适用于活体动物成像,可以支持电生理测量的附件.  除了可见范围的激光, 它有一个可调的, pulsed, 近红外Ti:S激光器用于紫外/可见光荧光团的多光子激发和二次谐波成像. 非扫描超级HyD探测器和贝克和希克尔SPC 830时间相关单光子计数系统使荧光寿命成像, 荧光相关光谱学, 以及基于寿命的FRET技术. 徕卡有光谱探测器,可以进行光谱成像.

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尼康和徕卡

三是自制全内反射荧光显微镜.  该仪器提供了一个通过棱镜的光束路径,以减少来自散射激光的噪声, 它包含三个目标选项(10X, 20X, 40X)和四条激光线(40X), 488, 552, 和647纳米).  图像是用安多iXon EMCCD科学相机拍摄的.

该团队还管理着Molecular Devices公司的倒置ImageXpress Micro 4宽视场显微镜, 配备了孵化室.  ImageXpress使用户能够在长时间内以高通量进行预编程实验.  此外,CU-IBIF还拥有另外两台用于基本成像需求的宽视场显微镜.

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TIRF和IMAGEXPRESS

可用软件包:

高级成像核心为THC和我们设施的用户提供了一系列分析工具.  我们有两个工作站运行Imaris显微镜图像分析软件, 哪些对处理3D和4D图像有帮助.  独立工作站可用于使用尼康的NIS元素和徕卡的LAS X软件.  有兴趣了解这些软件包并访问它们的用户可以与团队联系.  我们很乐意与您讨论您的图像处理需求, 我们也有使用各种其他程序进行分析和处理的经验, 包括ImageJ, MATLAB, Python, and R.

 

质谱核心提供了两个质谱仪,并提供了一个选择的软件,用于分析基于质谱的实验. 目前的能力包括质量测定, 蛋白质组学, 以及小分子的绝对定量. 请向Molly McDevitt (mollymcdevitt@aangny.com),如果您对质谱核心的功能有具体的疑问,请皇冠体育. 新用户必须在运行样本之前签署用户协议. 目前,将不提供个人使用仪器的培训. However, 我们将很乐意提供软件培训,以便用户可以完成他们自己的任何质谱分析数据, 如果需要.

仪表

质谱核心装有两个质谱仪. 两者都可以在克里斯二号303室找到.

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Bruker

布鲁克ultrafleXtreme是一款MALDI-TOF/TOF质谱仪,分辨率高达40,000在广泛的质量范围和高达1 PPM的质量精度. 它配备了MS和MS/MS功能,显示出两者的高数据采集速度. 它是各种生物分子的质量测定和结构鉴定的理想选择, 包括蛋白质, peptides, lipids, 和聚糖.

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Thermo

Thermo Q Exactive是一种混合四极轨道rap质谱仪,结合了高性能四极前驱体选择和高分辨率, 精确的质量(HR/AM)轨道rap检测. 它的分辨率高达140,000 FWHM,质量精度低于1ppm. 快速扫描速度, HR/AM能力, MS/MS的容量, 仪器的通用性使其成为小分子鉴定和定量的理想选择, peptides, 和蛋白质.

除了两个质谱仪, Criss II 303室也是两种不同的液相色谱(LC)系统的所在地. 与Thermo Q Exactive一起使用, 两种LC系统都能在分析前分离分析物, 降低样品复杂度,降低检测限.

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Thermo

Thermo Vanquish Flex二元UHPLC系统由生物相容性, binary, 高压梯度混合泵, 一个autosampler, 还有一个加热柱舱. 压力限制为1000 bar,流量范围为50 μ L - 8 mL/min, 它适用于各种分析, 包括小分子的绝对定量, lipidomics, 和代谢组学.

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Waters ACQUITY m级

Waters ACQUITY m级色谱系统提供了纳米流技术,在分析级UPLC系统中具有简单的设置.  Nanoflow技术, 与分析级UPLC系统相比,增加了灵敏度,是样品有限分析的理想选择. 压力极限为15,流量可低至200nl /min, 它最适合于自下而上的蛋白质组学, 包括依赖数据的获取, 有针对性的分析, 亲和纯化质谱法.  

软件包:

质谱核心为我们设施的用户提供了一系列分析工具:

·fleXAnalysis

·Xcalibur软件包

·TraceFinder.1

·蛋白质组发现者.1

对于对自己进行数据分析感兴趣的用户, 请与团队联系,我们将很乐意提供培训.

 

*大卫·史密斯导演,莫莉·麦克德维特协助

当发表一篇依赖于AVT核心设施内使用的设备的研究论文时, 请记得承认核心.  适当的致谢对于跟踪研究论文是至关重要的,并且符合我们的资助机构的要求.  我们建议您使用以下最适合您论文的声明(您可以简单地将此内容复制并粘贴到论文的致谢部分):

 

如果使用Imaging Core:


这项研究部分是在皇冠体育博彩大学的听觉和前庭技术中心(AVT)进行的, 奥马哈市东北 (RRID SCR_023866):. 该设施由克赖顿大学医学院提供支持,并获得了国家普通医学科学研究所(NIGMS)的GM103427和GM139762拨款。, 美国国立卫生研究院(NIH)的一个组成部分. 这项调查完全是作者的责任,并不一定代表NIGMS或NIH的官方观点.

 

如果没有使用Imaging Core:

这项研究部分是在皇冠体育博彩大学的听觉和前庭技术中心(AVT)进行的, 奥马哈市东北. 该设施由克赖顿大学医学院提供支持,并获得了国家普通医学科学研究所(NIGMS)的GM103427和GM139762拨款。, 美国国立卫生研究院(NIH)的一个组成部分. 这项调查完全是作者的责任,并不一定代表NIGMS或NIH的官方观点.